Câu hỏi thường gặp

1. Có thể phân tích loại mẫu nào?

Về cơ bản, bất kỳ hợp chất nào có thể ion hóa và sau đó phân mảnh đều có thể được sử dụng để phân tích MRM. Ví dụ điển hình nhất là phép đo protein và peptide, chất chuyển hóa hoặc thuốc trong hỗn hợp phức tạp như huyết tương và huyết thanh. Có thể định lượng protein thông qua thí nghiệm MRM trên các peptide đã tiêu hóa tương ứng với protein quan tâm. Điều này khiến phân tích MRM trở thành lựa chọn phổ biến để phát hiện và định lượng trong phân tích Biomarker. Như tên gọi của nó, có thể theo dõi nhiều hơn một MRM cho mỗi lần phân tích, cho phép phát hiện nhiều hợp chất trong cùng một thí nghiệm.

2.  Thể tích mẫu tối đa là bao nhiêu?

Thể tích mẫu phải nhỏ hơn 250µL.

3. MRM nhạy đến mức nào?

Đây là một kỹ thuật có độ nhạy cao. Có thể phát hiện các hợp chất peptide thường không thấy được bằng phương pháp MS thông thường. Ví dụ, peptide có thể được định lượng chính xác ở nồng độ femtomole. Trong các mẫu phức tạp như huyết tương, peptide có thể được định lượng ở nồng độ μg/ml.

4. MRM có tương thích với định lượng tuyệt đối hay tương đối không?

Kỹ thuật này có thể cung cấp kết quả cho cả hai loại định lượng. Định lượng tương đối thường đơn giản nhưng đối với định lượng tuyệt đối, cần có các tiêu chuẩn phù hợp. Đối với định lượng tuyệt đối, một peptide cụ thể được định lượng theo một tiêu chuẩn nội bộ được tăng đột biến (ví dụ: tiêu chuẩn peptide được gắn nhãn bằng đồng vị ổn định tổng hợp) để tạo ra phép đo nồng độ protein.

5. Có cần phát triển phương pháp không?

 Có. Mỗi dự án đều cụ thể và đòi hỏi nhiều thời gian của người vận hành để phát triển và chạy phân tích MRM. Đối với các hỗn hợp phức tạp, một số mẫu có thể cần được làm sạch bằng cách tách sắc ký đáng kể. Đối với huyết tương và huyết thanh, cần phải có thêm công việc chuẩn bị và sẽ tính thêm phí.

6.  Có quan trọng không khi proteome bạn đang xem xét hiện có trong cơ sở dữ liệu sẵn có?

 Có, phân tích lập bản đồ proteome hoạt động tốt nhất trên các mẫu từ bộ gen đã biết. Khi bộ gen được biết một phần, phương pháp lập bản đồ proteome sẽ cho kết quả hạn chế. Tuy nhiên,  các kỹ thuật giải trình tự de novo tiên tiến của Proteomics International  có thể được áp dụng.